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技術(shù)文章

垂直電泳槽使用時(shí)要注意的事項(xiàng)有哪些

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   垂直電泳槽一般來(lái)說(shuō)主要是用于對(duì)少量核酸及蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行垂直電泳,主要是蛋白樣品的電泳,在進(jìn)行種子的有些試驗(yàn)中會(huì)用到。垂直電泳槽從特點(diǎn)上來(lái)看,其中間是夾在一起的兩塊玻璃板,玻璃板兩邊由墊條隔開(kāi),在玻璃平板中間制備電泳凝膠,凝膠的大小通常是12cm~14 cm,厚度1mm~2 mm,近年來(lái)新研制的電泳槽,膠面更小、更薄,以節(jié)省試劑和縮短電泳時(shí)間。制膠時(shí)在凝膠溶液中放一個(gè)塑料梳子,在膠聚合后移去,形成上樣品的凹槽。
  垂直電泳槽是一種與圓盤(pán)電泳槽在原理與結(jié)構(gòu)上略有相似,卻在制膠和電泳方面存在某些差異的電泳槽種類中的一種。它一般被應(yīng)用于分子生物學(xué)等領(lǐng)域。由于垂直電泳槽在使用過(guò)程中的要求較高,在使用時(shí)應(yīng)當(dāng)注意一些事項(xiàng)。
  1、分離膠濃度的選擇。低濃度膠對(duì)大分子量蛋白質(zhì)分離效果好:高濃度膠對(duì)小分子量蛋白質(zhì)分離效果好;
  2、清洗玻璃板。玻璃板應(yīng)清洗干凈,玻璃表面的油污會(huì)造成分離膠與濃縮膠界面的不平整。經(jīng)用去污劑洗滌后的玻璃板先用蒸餾水沖洗,再用紗布蘸乙醇擦拭玻璃表面;
  3、TEMED的加入量。TEMED是促進(jìn)丙烯酰胺聚合的加速劑。加*果隨試劑保存時(shí)間而變化。對(duì)于陳舊試劑,可適當(dāng)多加。事實(shí)上,配制分離膠時(shí)每塊膠板按2滴加入,效果也不錯(cuò);
  4、丙烯酰胺的毒性。丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺都是神經(jīng)性毒劑,對(duì)皮膚有刺激作用。但在形成凝膠后則無(wú)毒。操作時(shí)應(yīng)戴橡膠或塑料手套,盡量避免接觸皮膚,并注意實(shí)驗(yàn)后洗手;
  5、電極緩沖液的配制。電極緩沖液的用量大、占體積、配制麻煩。如果經(jīng)常跑膠,可考慮配制5X濃度的濃縮液。方法如下:將144g甘氨酸和30﹒2gTris溶于1升蒸餾水中。使用時(shí)稀釋5倍。

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